本发明公开了一种从含有聚唾液酸的物料中分离提纯制备N‑乙酰神经氨酸的方法，以含有聚唾液酸的物料为原料，通过除菌及固形物、除蛋白、脱色、水解、除盐、结晶等步骤获得了高纯度的N‑乙酰神经氨酸产品，经测试其纯度至少为98％，可以满足其在食品、保健、医药和化妆品等领域的要求。本发明的方法简单易操作，特别适合于工业化发酵生产N‑乙酰神经氨酸。