本发明涉及的是化学分析检测技术领域，具体涉及一种多多信号比率型区分检测H2O2和H2S的荧光探针的制备方法以及该荧光探针在体外和活细胞内检测H2O2和H2S方面的应用。该探针化合物的结构式如式(I)所示。我们将两种识别基团通过染料的桥连构建到一个分子上，比率型荧光信号通过两个荧光信号的比值作为输出信号，探针分子本身的自校准能够克服诸如探针浓度、仪器灵敏度和环境因素带来的影响，提高荧光检测的准确性。通过探针与H2S和H2O2反应后获得不同组合的荧光信号来实现对H2S和H2O2的区分检测。此外该系列化合物有望在生物医药，光电以及环境保护领域有着较好的应用前景。