本发明提出了循环肿瘤细胞的分离和培养方法、筛选药物的方法、确定药物有效性的方法和培养基。所述循环肿瘤细胞的分离和培养方法包括：采用Human CD45 Depletion Cocktail试剂盒除去抗凝外周血中的CD45阳性细胞，以便得到CD45阴性细胞液；利用密度梯度离心法对所述CD45阴性细胞液进行处理，收集离心后的上层和中间层的细胞液；以及对所述细胞液中的细胞进行培养。利用本发明循环肿瘤细胞的分离和培养方法能够有效地富集循环肿瘤细胞，得率较高，纯度较好，操作简便，适于规模化应用。