本发明公开一种层流式活细胞培养设备，包括培养箱、第一过滤层、第二过滤层、双向风机、总管道、上层培养皿、温控室、中层培养皿、下层培养皿，培养箱的上层设有第一过滤层，第一过滤层下设有第二过滤层，第二过滤层下设有双向风机，双向风机的出口处设有总管道，总管道通过支管连通通气管，总管道下依次设有上层培养皿、中层培养皿、下层培养皿，上层培养皿、中层培养皿、下层培养皿之间均铺设有通气管，并且上层培养皿与通气管之间还设有温控室；本发明可保证空气的洁净，避免培养的细胞受外界环境的影响，双向风机可根据需要调整培养皿内部的湿度和温度，同时培养不同种类的细胞，培养箱整体为瓶状，方便气流过滤与通畅，构成优良的培养环境。