本发明提供了一种乙酰化透明质酸钠的制备方法，步骤如下：透明质酸或其盐在乙酸和乙酸酐混合溶剂中，浓硫酸催化下进行酰化反应，反应结束后将反应液流加入水中析出沉淀物，经过滤和洗涤后得到乙酰化透明质酸，加入碱液调节溶液pH值近中性，过滤除杂后喷雾干燥得乙酰化透明质酸钠。使用本方法制得的乙酰化透明质酸钠，可大大缩短制备时间，可避免使用大量有机溶剂进行沉淀和洗涤，在保护环境的同时降低了成本，特别适合工业化大生产。