本发明涉及一种羊痘灭活疫苗及其制备方法。本发明采用山羊痘病毒AV41株接种BHK‑21细胞，收获培养物，经浓缩、纯化、BEI灭活后，按一定比例加入适宜佐剂混合乳化制成。用于预防山羊痘和绵羊痘。采用本发明提出的悬浮培养BHK‑21细胞生产羊痘灭活疫苗，较原绵羊睾丸细胞制备的活疫苗具有明显的优势，即解决了目前羊痘活疫苗生产过程中面临的绵羊睾丸来源困难的问题，又避免了原代细胞携带外源病毒的生物安全风险，且所制备的疫苗不存在羊痘活疫苗易引起羔羊死亡、母羊流产等安全隐患。此外，本疫苗可经颈部皮下或肌肉注射免疫，解决了羊痘活疫苗需皮内免疫，在临床使用过程中难以操作的难题。