本发明属于医药化妆品技术领域，具体涉及一种HANK细胞培养上清液制备及其在化妆品中的应用。HANK细胞培养上清液的制备方法包括以下步骤：(1)采集自体或异体健康人抗凝外周血或脐带血；(2)用淋巴细胞分离液分离单个核细胞；(3)把所得外周血单核细胞悬浮在NK细胞无血清培养液中，添加IL‑2及膜嵌合细胞因子，37℃及CO2孵箱中培养10‑16天，常温条件下离心分离HANK细胞及其上清液，分别收集HANK细胞及其培养上清液；(4)上清液作为化妆品原料，直接使用，或冻干后备用；HANK细胞另作它用。