本发明提供了一种油酸包裹的超顺磁性纳米Fe3O4的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：在空气中，向二价铁盐的水溶液中加入氨水，搅拌；加入油酸，混合均匀后在60～130℃下加热反应3～5小时，即可得到所述油酸包裹的超顺磁性纳米Fe3O4。本发明提供了一种结合了水热法和共沉淀法的优点，制备超顺磁性纳米Fe3O4的方法，同时克服了水热法需要高温高压的缺陷和共沉淀法需要氮气保护的缺陷。得到的超顺磁性纳米Fe3O4为纯黑色，说明纳米Fe3O4的纯度高，同时纳米Fe3O4为近似球形，晶体结构好，适用于制备免疫磁珠。