本发明提供一种噬菌体展示文库及其应用和制备方法。所述噬菌体展示文库包含一系列各自独立地具有三维结构的抗体性多肽，所述多肽中的每一者均包含具有抗体性重链CDR1、CDR2和CDR3结构域的重链、以及具有抗体性轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域的轻链，其特征在于：所述抗体性重链CDR1、CDR2和CDR3结构域以及所述抗体性轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域都具有强随机突变性位点，所述强随机突变性位点是位于所述多肽三维结构表面上的用于结合靶抗原的且非保守性的位点，所述强随机突变性位点是由强随机突变简并密码子编码的氨基酸，并且所述强随机突变简并密码子不包括终止密码子。本发明的噬菌体展示文库同时具有多样性和筛选高效性。