本发明提供一株疫苗株rSHA‑△200及其构建方法和应用，涉及流感疫苗领域。所述疫苗株rSHA‑△200包括不含有NRT糖基化位点的HA基因。本发明通过分析，找出其HA蛋白上潜在的糖基化位点，并通过定点突变技术缺失糖基化位点，构建多个糖基化位点缺失的HA表达质粒，利用8质粒反向遗传技术获得重组疫苗株，并制备抗血清，通过对比发现：本发明得到的rSHA‑△200具有良好的交叉免疫能力和血清交叉中和能力，是一种理想的H9亚型AIV灭活疫苗候选株。