本发明公开了一种利用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的方法，该方法包括：将复苏后的杂交瘤细胞置于第一细胞培养基中进行传代培养和扩大培养，该第一细胞培养基中血清的体积分数大于10％；将杂交瘤细胞转移至第二细胞培养基中进行扩大培养，该第二细胞培养基中血清的体积分数小于等于10％；将杂交瘤细胞转移至无血清细胞培养基中培养，进行单克隆抗体的生产。本申请通过采用第一细胞培养基进行“富养”、采用第二细胞培养基进行“均一群养”，确保不同批次的杂交瘤细胞在抗体生产起始时的浓度和体积保持一致，使得整个生产流程可以广适于不同的杂交瘤细胞株，抗体生长周期稳定；在无血清细胞培养基中生产单克隆抗体，抗体产品质量高。