本发明提供了一种猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明将猪脾脏、鸡法氏囊和水混合后匀浆，得到的匀浆液反复冻融5～7次后与乙酸混合后依次进行搅拌、离心、灭活和水解，将得到的灭活水解液超滤、除菌，得到无菌液浓缩至无菌调节液体积的19～21％，得到猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液。本发明提供的制备方法制备得到的猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液中核糖多肽含量高，且本发明制备的猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液配合猪瘟活疫苗使用可以大大提高猪只的抗体水平。