本发明提供一种人急性B淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株及其构建方法和应用，其细胞名称是人急性B淋巴细胞白血病细胞株NALM‑6/HDR，保藏编号为CCTCCNO：C2017234；先将人急性B淋巴细胞白血病细胞株NALM‑6置于低氧条件下培养后，一次性加入0.25μM地塞米松，然后继续低氧培养，最后置于常氧条件下扩大培养，从而获得人急性B淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株NALM‑6/HDR。本发明为复发难治人急性淋巴细胞白血病的研究和生物医药研发提供新的细胞模型，在探索人急性B淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药的发病机制、复发难治机制和逆转耐药药物研发的应用中有较大的实用价值。