本发明提供一种人类PTX3重组蛋白的制备方法及应用，包括：构建人类PTX3重组蛋白真核细胞表达载体、敲除CHO‑K1细胞中的促凋亡因子、磷酸钙转染程序以及人类PTX3重组蛋白富集和纯化，本发明构建了能在哺乳动物细胞中稳定高表达蛋白的载体，通过抗生素筛选以及培养液条件的改进，建立产量较高，表达稳定。