本发明提供一种测定透明质酸含量的方法，其包括：利用透明质酸酶对包含透明质酸的待测样品进行酶解；使用用于分析有机酸的离子交换柱，利用不含盐的流动相，检测由透明质酸酶酶解后的透明质酸；以及基于检测结果计算该待测样品中所含的透明质酸的含量。本发明方法中的色谱柱的耐用性好，且流动相中不需要添加缓冲盐，能够有效地检测透明质酸。