本发明涉及一种新利司他中杂质A生物样品的测定方法，属于医药技术领域。该方法采用超高效液相色谱‑电喷雾离子化串联质谱法(UPLC‑MS/MS)来检测生物样品中新利司他杂质A浓度。本发明所建立的新利司他杂质A血浆样品LC‑MS/MS测定法在准确度、精密度、专属性、稳定性、提取回收率及基质效应等方面均达到了中国药典2015年版以及SFDA2014年颁布的《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》对生物样品的分析要求。为新利司他新药开发以及指导临床合理用药提供了有力保证。