本发明涉及产生牛妊娠相关糖蛋白特异性单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株、单克隆抗体、试剂盒及检测，其为两株产生牛PAG特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由该杂交瘤细胞株产生的两种特异性单克隆抗体H4和G7，检测牛PAG的试剂盒及其检测方法，该细胞株保藏编号分别为CCTCC NO：C2018170、CCTCC NO：C2018171。该试剂盒包含上述的两种单克隆抗体，并且，以H4作为捕获抗体，以G7作为检测抗体进行检测。在检测奶牛体内PAG浓度时，与奶牛体内的天然PAG具有较好的识别能力和结合能力，并通过建立标准的双抗体夹心ELISA体系，能够准确检测标本中的牛PAG，并以此成功建立了检测牛PAG的双抗体夹心ELISA方法，对多种形式的PAG免疫检测试剂的进一步研究具有很大的意义。