本发明属于生物医药领域，尤其是涉及一种NK细胞的体外活化扩增培养方法。在激活剂预处理中，是在培养瓶中加入激活剂和PBS进行混合后，所述激活剂含有0.10mg‑100.00mg/ml的透明质酸和0.1μg‑20μg/ml的CD16抗体，激活剂和PBS的体积比为1 : 40；活化处理，吸除激活剂，然后加入生理盐水，轻晃培养瓶，最后吸除生理盐水, 得到已包被的培养瓶。在培养单个核细胞时向培养基中添加GM‑CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)，使其终浓度在0.05μg‑1.00μg/ml之间。相比于已有的专利方法，更为简单有效，有效地降低了NK细胞的体外扩增培养成本。在包被步骤中，加入透明质酸，显著地增加NK细胞的比例和扩增倍数；具有极大的市场前景和经济价值。