本发明公开了一种腈水解酶突变体、基因、载体、工程菌及制备R‑扁桃酸的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第190位丝氨酸进行定点突变获得的；本发明所述的腈水解酶突变体(氨基酸序列为SEQ ID NO.12所示)较亲本腈水解酶(氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示)比酶活提高3.0倍，对映体选择性从94％提高到大于99％。结果表明，腈水解酶突变体(氨基酸序列为SEQ ID NO.12所示)能够用少量湿菌体(10g/L)在30min内完全水解100mM扁桃腈，对映体选择性大于99％。可用于工业化生产医药中间体R‑扁桃酸。