本发明公开了一种生产D‑甘露糖的方法，属于食品生物技术领域。本发明优化假单胞菌(Pseudomonas sp.)SK 27.016的培养方法，以D‑果糖和葡萄糖作为混合碳源，并在培养过程中补加葡萄糖，获得高活力的菌株。以此菌株催化D‑果糖制备D‑甘露糖，产量可以得到大幅提高，最高可达41g/L，转化率达到41％。本发明方法为D‑甘露糖的大规模工业化制备提供可能。本发明生产的D‑甘露糖安全可靠，是一种很有市场潜力的功能性产品，被广泛的应用于食品、化妆品、医药等行业。本发明能高效地生产D‑甘露糖，适于进行大规模生产。