本发明公开了一种L‑氨基酸氧化酶的突变体及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对来源于谷氨酸棒杆菌的L‑氨基酸氧化酶进行定点突变，获得突变体Q183A，将突变体Q183A在大肠杆菌中进行异源表达，得到的重组菌对L‑缬氨酸的催化效率提高了18.7％，α‑酮异己酸的产量达到54.6g/L，底物摩尔转化率为84.6％。本发明提供的全细胞转化方法较化学法相比，具有反应条件温和，目标产物单一，易于分离，对环境友好等优势，且工艺简单，便于控制，易于推广应用。