本发明提供了一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法及其应用，本发明的细胞制备方法包括使用人源诱导多能干细胞进行无滋养细胞的单层细胞无血清培养，同时使用小分子抑制剂进行诱导细胞定向分化为神经干细胞。本发明证明这种方法诱导得到的神经干细胞具有分化为神经元的能力，且具有电生理功能。本发明使用纯化学分子替代蛋白质信号拮抗物，使用非动物源性的生长因子来替换传统的动物源性的生长因子，从而实现了无血清无动物源性的神经干细胞诱导培养方法，解决了动物源性培养方法制约神经干细胞在临床上的使用问题；同时无需使用滋养层细胞，因而得到的细胞不受其它细胞的污染，解决了长久以来滋养细胞污染的问题，在临床上更安全。