本发明属于生物技术领域，涉及一种桦褐孔菌素D提取物及其制备方法与检测方法。经过桦褐孔菌粗粉制备、酵母菌发酵液配制、桦褐孔菌发酵液制备、桦褐孔菌发酵提取物制备、桦褐孔菌发酵萃取物制备、桦褐孔菌素D提取物制备等步骤得到桦褐孔菌素D提取物。该桦褐孔菌素D提取物中桦褐孔菌素D的含量较高。本发明还提供了采用高效液相色谱法测定桦褐孔菌提取物中桦褐孔菌素D含量的方法。