本发明属于生物医药领域，具体涉及一种免疫增强型多价疫苗及其制备方法和应用。本发明的多价疫苗由LAG‑3干扰基因重组表达载体和融合多肽通过静电作用结合，所述LAG‑3干扰基因重组表达载体由LAG‑3 RNAi片段和真核表达载体连接组成。通过融合多肽的合成与纯化、LAG‑3干扰基因重组表达载体的构建及LAG‑3干扰基因重组表达载体与表位肽的连接着这三个步骤制成。本发明的多价疫苗能有效激发特异性CTL应答，刺激T细胞活化，从而产生广泛的免疫激活效应，诱导强有力的抗肿瘤免疫并通过激发CTL产生细胞毒效应，杀伤胶质瘤细胞，且制备方法简单，成本低廉，在胶质瘤治疗领域有着较好的开发应用前景。