本发明公开了一种决明子对照提取物及其制备方法和用途。决明子对照提取物的制备方法包括：(1)将将决明子醇提物上大孔吸附树脂柱，得到半制备组分Ⅰ；(2)将所述半制备组分Ⅰ与拌样用空白硅胶混合均匀，得到拌样硅胶；(3)将层析用空白硅胶干法装柱，再装入所述拌样硅胶，上样，从而得到硅胶色谱柱；然后以洗脱剂对所述硅胶色谱柱洗脱；(4)将洗脱后的硅胶色谱柱自柱头向底部平均分成18～24份，分别加甲醇洗脱得到甲醇洗脱液，检测，将含有指标成分的甲醇洗脱液合并，干燥，得到所述决明子对照提取物。本发明的制备方法工艺简单且适合大规模制备。