本发明公开了高热稳定性β‑葡萄糖苷酶突变体及其应用。本发明提供了一种热稳定性提高的β‑葡萄糖苷酶突变体，是在野生型β‑葡萄糖苷酶氨基酸序列的基础上突变得到，突变位点为：T167I/V181F/A298G或T167I/V181F/K186T/A187E/A298G，得到突变体2R1和4R1的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1和2所示。该β‑葡萄糖苷酶突变体2R1和4R1在50℃下的半衰期分别是野生酶Ks5A7的285倍和8640倍，对纤维二糖的水解活性分别是野生酶的1.75和1.5倍，且依然保持了对葡萄糖的高耐受性。因此，利用该β‑葡萄糖苷酶突变体可以大大提高β‑葡萄糖苷酶的热稳定性，为其在食品、生物能源、纺织、造纸、医药领域提供了应用基础。