本发明涉及一种生物粘合剂的制备方法，特别是一种透明质酸生物粘合剂的制备方法，属于生物材料制备技术领域。本发明是通过在冷冻干燥法制得的无定型透明质酸分子链上接枝烯基基团，经溶解、混合制备得到的生物粘合剂。本发明采用混合溶剂环境下的冷冻干燥工艺，大大破坏透明质酸的晶型结构，形成无定型结构的透明质酸分子，使得透明质酸的接枝率大大提高，完全克服因接枝率低下引起的紫外固化速度缓慢、形成的凝胶强度差的问题。本发明方法制得的生物粘合剂在紫外光的照射下迅速凝胶，且凝胶安全、生物相容性好、可完全降解吸收。本发明制备方法简单、成本低，易工业化生产。