一种H7N9假病毒的制备方法及该H7N9假病毒的应用，属于生物医药技术领域。它是将H7N9禽流感病毒的HA，NA基因序列克隆至哺乳动物表达载体pVAX‑1，然后用pVAX‑HA，逆转录病毒载体pNL‑4.3.luc.E‑R‑等质粒共转染293T细胞产生H7N9假病毒颗粒。利用H7N9假病毒及假病毒细胞模型筛选抑制H7N9禽流感病毒进入细胞抑制剂和神经氨酸酶抑制剂，利用H7N9假病毒进行流感病毒中和抗体的研究，利用H7N9假病毒作为抗流感免疫制剂预防和治疗流感病毒感染。