本发明公开了一种高产α‑酮异戊酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段将来源于谷氨酸棒杆菌编码L‑氨基酸氧化酶的基因与表达载体相连。将构建好的表达质粒导入E.coli BL21(DE3)，通过卡那霉素抗性平板筛选获得重组的含L‑氨基酸氧化酶工程菌。用于转化L缬氨酸生产α‑酮异戊酸。通过控制温度和pH，金属离子、实现α‑酮异戊酸的高效生产。在25℃、pH＝8.0、菌体量30g/L，底物浓度65g/L的条件下。α‑酮异戊酸的产量最高可达51g/L，转化率为79.1％。