本发明提供了一种脐橙皮精油及其制备方法和应用，属于医药技术领域。所述制备方法包括如下步骤：1)将粉碎后的脐橙皮与无机盐和水混合，将得到的混合物蒸馏2.5～3.5h，收集蒸馏液；2)将所述步骤1)的蒸馏液与石油醚混合进行萃取，将得到的有机层依次用无水硫酸钠进行干燥和旋蒸，得到淡黄色脐橙皮精油。本发明制备得到的精油能够有效的抑制癌细胞，实施例结果表明：当精油浓度大于等于0.3μg/mL时，精油对HepG2肝癌细胞和HCT116肝癌细胞的增殖均有较好的抑制作用。