本发明提供了一种油佐剂疫苗的破乳方法，包括以下步骤：将油佐剂疫苗与正丁醇混合，然后加入竞争剂，振荡混匀后，离心，即得水相抗原样品；所述竞争剂为氨基酸及其衍生物中的至少一种。该方法通过加入竞争剂与表面活性剂竞争抗原结合位点，从而将油佐剂疫苗中的抗原释放至水相中，与不加竞争剂相比，大大提高了水相中的抗原回收率，回收率达到85％以上。且本方法能对所有油佐剂疫苗进行破乳，同时在原有破乳方法基础上最大化破乳效率。