本发明提供了一种口蹄疫抗原的定量方法，所述方法包括以下步骤：A、配置不同浓度的口蹄疫抗原标准样品，采用HPLC对标准样品进行测定，获得标准抗原浓度和抗原吸收峰面积的关联公式；B、将待测样品进行预处理，然后采用HPLC测定其抗原吸收峰面积，根据步骤A的关联公式计算待测样品的抗原浓度。本发明解决了HPLC无法在口蹄疫病毒定量中的无法广泛使用的困境，使得HPLC使用范围更加广泛和准确。且本发明采用添加杂蛋白的预处理，可大大缩短样品的处理时间，提高检测的准确性。