本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及三重转录因子及其在哺乳动物蛋白表达系统的应用。本发明提供了一种转录因子组合物，其含有ELL转录因子、AFF转录因子和CRTC转录因子，本发明提供了一种重组载体，其是将转录因子组合物克隆到哺乳动物表达载体中而得到。本发明还提供了一种哺乳动物蛋白表达系统，其通过将重组表达载体与目的基因表达载体共同转染到细胞株中表达得到，所述重组表达载体的总量与目的基因表达载体的总量的比为1：1‑5，或者通过将含有三重转录因子的目的基因表达载体转染到细胞株中表达得到。本发明所得到的哺乳动物重组蛋白表达系统与传统方法相比，具有高产量、低成本的优势，能够有效提高重组蛋白的产量，并保持其完整的翻译后修饰来提高生物活性。