本发明提供一种人TWIST1/Vimentin基因甲基化检测标志物以及试剂盒，所述人TWIST1/Vimentin基因甲基化检测标志物包括TWIST1、Vimentin和ACTB三种基因的甲基化引物和探针。本发明能够用于膀胱癌的检测、辅助诊断以及复发的预测、疗效评价等方面，具有灵敏度高、特异性强、检测成本低、取材方便、样本易存放等优点。