本发明公开了一种使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，包括以下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱，以乙腈、甲醇中的一种或两种的混合物为流动相A，以甲酸水溶液、乙酸水溶液、磷酸水溶液中的一种为流动相B，对一贯煎试样溶液进行梯度洗脱，然后采用DAD检测器进行检测。本发明提出的一种使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，具有快速、简便、全面、准确可靠的优点。