本发明公开了一种L‑天冬氨酸α‑脱羧酶的基因工程菌株以及应用，具体涉及一种以L‑天冬氨酸α‑脱羧酶的基因工程菌株催化合成β‑丙氨酸的方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明通过建立并优化全细胞催化工艺，采用底物分批补加的方式，加入四次底物后，野生型重组菌株转化23h生成β‑丙氨酸约123.81g/L；K221R突变株转化23h可使产物β‑丙氨酸浓度达到134.72g/L；G369A突变株转化23h可使产物β‑丙氨酸浓度达到136.33g/L。此方法使β‑丙氨酸产量得到较大提高，这一发现对于工业化制备β‑丙氨酸具有重要的应用价值。