本发明公开了一种利用亮氨酸脱氢酶偶联葡萄糖脱氢酶制备L‑叔亮氨酸的方法，属于酶工程和手性医药中间体制备技术领域。本发明方法包括向反应体系中添加底物三甲基丙酮酸，葡萄糖，调节体系的pH值在8.0‑9.0，加入经过外加烟酸等物质的培养基培养过的共表达菌株破碎的粗酶液(包含亮氨酸脱氢酶，葡萄糖脱氢酶及辅酶)之后开始反应，通过控制反应过程的温度在25‑30℃，pH值在8.0‑9.0，生产L‑叔亮氨酸。本发明通过采用亮氨酸脱氢酶偶联葡萄糖脱氢酶体系，利用菌体自身含有的辅酶，进行L‑叔亮氨酸制备，具有单批次反应底物浓度高，反应效率高，不需要辅酶添加等特点。