本发明涉及五没食子酰葡萄糖化学对照品的制备方法。芒果核仁经乙醇水溶液加热回流提取，再经聚酰胺柱层析分离和反相硅胶柱色谱精制三个步骤，即可获得纯度达98％以上的五没食子酰葡萄糖化学对照品。本发明工艺步骤简单，采用的乙醇溶剂安全无毒，而且五没食子酰葡萄糖化学对照品得率高，制备量大。