本发明属于生物化学和医药技术领域，涉及一种能特异性靶向人肺组织肺泡表面活性蛋白A(SP‑A)的纳米抗体、其制备方法及其应用。所述纳米抗体包括如Q(X)2LVESGG(X)2V(X)2G(X)SL(X)LS(X)24E(X)n2KG(X)4S(X)n3T(X)2Y(X)C(X)n4S(X)n5V(X)n6R所示的氨基酸序列；其中，X表示任意氨基酸，n2～n6为正整数，1≤n2≤21，1≤n3≤19，1≤n4≤50，1≤n5≤22，1≤n6≤8。本发明中用人肺新鲜冰冻切片为抗原，亲和淘筛前期构建好的SP‑A纳米抗体库，并获得能与人肺SP‑A具有高结合力的基因序列，再通过原核表达载体对这些基因序列进行蛋白诱导表达，即得到分子量小，亲和力强的纳米抗体。随后使用细胞荧光、免疫组化和裸鼠体内显像的方法检测出所获得的人肺组织纳米抗体存在高度特异性肺靶向性。