本发明涉及麦角硫因的生物合成制备方法和发酵培养基，该方法包括如下步骤：步骤1：将猴头菌(Hericium erinaceus)菌丝体斜面菌种接种至液体种子培养基中培养，获得种子液；步骤2：将获得的种子液接种至发酵培养基中发酵并添加前体物质培养，通过pH判断发酵至发酵终点，获得发酵液；步骤3：发酵结束后，加入酶，酶解至终点，升温灭酶，将菌丝体的细胞内的麦角硫因浸提至细胞外的发酵液中。利用本发明的方法，能够提高麦角硫因的产量，可快速简便地判断发酵终点，减少发酵副产物的产生，使用酶破碎菌丝体细胞，麦角硫因浸提完全。