本发明公开了一种曲普瑞林的纯化方法，属于纯化分离技术领域。本发明首先用含有机溶剂的水溶液溶解粗肽，以10μm、反相聚合物填料为固定相，以磷酸三乙胺为A相，甲醇为B相，进行梯度洗脱；然后以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以三氟乙酸水溶液为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱；后将曲普瑞林转成醋酸盐、冻干得到纯度大于99.9％，单杂小于0.02％的醋酸曲普瑞林，纯化收率大于80％，总收率高达50％以上。本发明解决了目前该产品纯化及总收率不高，成品纯度低等问题，且工艺稳定可控，适合产业化生产，有着显著的社会经济效益。