本发明属于纳米材料制备技术领域，具体涉及一种生物相亲性磁性四氧化三铁纳米粒子的制备方法，该方法以六水合氯化铁为铁源，无水醋酸钠为还原剂，乙二醇为溶剂，适量的聚乙烯亚胺为表面相亲性改性剂，经聚四氟乙烯高压反应釜一步反应制得可直接应用于生物医药领域内的生物相亲性磁性Fe3O4纳米粒子。本发明工艺简单，操作方便，原料易得，经济高效，环境友好，可批量生产，所制得的磁性纳米粒子在生物医药领域内具有很大的应用价值。