本发明公开了一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用，属于发酵技术、酶制剂、制糖工业领域，本发明通过正交实验优化培养基成分和发酵条件确定球毛壳菌高产右旋糖酐酶的发酵方法，提高了右旋糖酐酶的产量，达到698.22U/mL，右旋糖酐酶水解高分子量葡聚糖，在酶的终浓度为2U/ml，15分钟内，对高分子量的葡聚糖(T2000)水解速率达到97.9％，球毛壳菌右旋糖酐酶对变异链球菌形成生物膜的抑制率达到71.58％，对生物膜的清除率达到49.07％，本发明方法在食品和制糖工业以及医药领域具有很好的应用前景。