本发明提供了一种口蹄疫病毒的灭活方法，包括以下步骤：在口蹄疫病毒细胞培养液中加入补骨脂素类化合物，然后进行光照处理，即得灭活的口蹄疫病毒溶液。本发明具有如下的有益效果：1、极大简化灭活工艺缩短了灭活工艺时间；2、提高了灭活工艺稳定性；3、减少抗原损失；4、相比其他灭活剂补骨脂素无毒，不会对动物造成免疫副反应；5、有消除其他细菌和病毒的作用，有利于提高疫苗的抗污染性，提高产品质量，延长储存时间。