本发明涉及一种羊痘、山羊传染性胸膜肺炎二联灭活疫苗及其制备方法。本发明采用山羊痘病毒AV41株和山羊支原体山羊肺炎亚种C87001株分别接种悬浮培养的BHK‑21细胞和适宜培养基培养，收获培养物，经浓缩、纯化，分别用BEI和硫柳汞灭活后，按一定比例加入适宜佐剂混合乳化制成。用于预防山羊痘和山羊传染性胸膜肺炎。本发明系国际上首次获得羊痘和山羊传染性胸膜肺炎的二联灭活疫苗，可实现一针两防的目的，同时，采用本发明提出的悬浮培养BHK‑21细胞生产羊痘灭活疫苗，较原绵羊睾丸细胞制备的活疫苗具有明显的优势，可解决目前羊痘活疫苗生产过程中面临的绵羊睾丸来源困难、易引起羔羊死亡、母羊流产，以及疫苗需皮内免疫，在临床使用过程中难以操作等问题。