本发明公开了一种长效EPO活性检测方法。设置生理盐水组为空白组，短效EPO组为对照组，待测药物组，分别将生理盐水、短效EPO和待测药物对小鼠进行皮下注射，定期采集血液；然后用流式细胞仪检测血液中网织红细胞含量，并计算网织红细胞的百分率；和/或用细胞计数仪检测血液中血细胞的数量，计算血细胞中含有的网织红细胞的数量；通过网织红细胞含量和/或网织红细胞的数量来判定待测药物是否为长效EPO。本发明克服了上述缺陷，将待测药物注入小鼠体内，对血液中的网织红细胞含量和/或网织红细胞的数量进行判断，从而来判断待测药物是否为长效EPO的，其操作简单，准确。