一种定量测定儿茶酚‑O‑甲基转移酶活性的方法及其应用，属生物医药技术领域。该方法采用4‑乙酸‑7, 8‑二羟基香豆素为COMT酶的特异性探针底物，该底物可被COMT酶专一性催化生成8‑甲氧基产物并在520nm处显示荧光信号，通过检测荧光强度的变化可定量测定COMT的活性。本发明不仅可用于不同来源生物样本中COMT酶活的定量评估，还可用于体外快速筛选COMT的抑制剂并评估其抑制能力。该方法可用于各类体外生物样品中COMT酶真实活力的定量评估，实现抑制剂的快速筛选及抑制能力的定量评价；可用于评价不同种属COMT及具有不同氨基酸序列的COMT突变体的催化活性，进而评估其代谢儿茶酚类药物的能力。本发明方法具有(1)高选择性，(2)廉价易得；(3)高灵敏度等优点。