本发明提供了一种新型改进免疫层析试纸条及其制备和应用。本发明在标记了待测物抗体的胶体微粒结合物释放垫与反应膜之间增设一个缓冲垫，让从释放垫上崩解下来的抗待测物抗体的胶体微粒上反应膜之前，能在缓冲垫内更均一地溶解在检测样品中，并获得相对充足的反应时间与对应的目的检测物进行更充分地免疫反应，从而达到抗待测物抗体与样品中目的检测物反应效率的最大化。本发明与现有的免疫层析试纸条相比，具有灵敏度高、假阳率低及检测线色均匀等优点，而且成本低廉，制作简便，适用于各种形式的免疫层析法检测试纸。