本发明公开了一种以磷脂酶D转化制备磷酯酰丝氨酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明是以磷脂酶D为催化剂，并以PC60和L‑丝氨酸为底物，通过优化底物摩尔比、反应pH、温度、反应时间、酶添加量、盐离子种类及浓度等，发现底物摩尔比为磷脂：丝氨酸＝1 : 9‑11，pH选择5.5左右，反应温度45度，磷脂酶D酶液加量50U/g磷脂酰胆碱条件下，反应6小时后，磷酯酰丝氨酸(PS)产率为55.1％，底物磷脂酰胆碱(PC)剩余2％，几乎无副产物(PA)生成。