本发明公开了一种鸡骨草总皂苷的制备工艺及其在抗乙肝病毒中的应用，在最佳工艺条件下制备得到的总皂苷粉末状样品，红褐色，经过紫外检测纯度达到53％以上，不同提取工艺提取的总皂苷所含成份均有所不同，本工艺提取出的总皂苷质量稳定，并对其药理活性进行了细胞水平和动物水平的验证，证明了本发明中制备工艺得到的鸡骨草总皂苷对乙肝病毒的两种抗原HBsAg、HBeAg和DNA均有明显的抑制作用，并且起效快。